trigliceridi - intermedical

TRIGLICERIDI
TRIGLICERIDI
GPO-POD.Enzimatico Colorimetrico.
Determinazione quantitativa dei trigliceridi
Conservare a 2-8°C
IVD
Tappare e mescolare delicatamente per sciogliere completamente
il contenuto.
Il
reagente
è
stabile
per
6
settimane
dopo
la
ricostituzione,mantenuto a 2-8°C o 1 settimana a T.A. (15-25°C).
PRINCIPIO DEL METODO
I trigliceridi presenti nel campione,incubati con la lipoproteinlipasi
(LPL),libera glicerolo e acidi grassi liberi.Il glicerolo viene trasformato
a glicerol-3-fosfato (G3P) e ADP dalla glicerolo kinasi e dall’ATP.Il
G3P è poi trasformato dalla glicerol fosfato deidrogenasi (GPO) a
diidrossiacetone fosfato (DAP) e perossido di idrogeno (H2O2).
Nell’ultima reazione,l’H2O2 reagisce con il 4-aminofenazone (4-AP) e
p-clorofenolo in presenza di per ossidasi (POD) producendo una
colorazione rossa:
CONSERVAZIONE E STABILITA’
Tutti i componenti del kit sono stabili fino alla data di scadenza
indicata sull’etichetta se conservati ben chiusi a 2-8°C,protetti dalla
luce e se si evitano contaminazioni durante l’uso.
Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza.
Cal.Trigliceridi:una volta aperto il flacone,il reagente è stabile fino
a 1 mese se conservato ben chiuso a 2-8°C, protetto dalla luce e
se si evitano contaminazioni durante l’uso.
Segnali di deterioramento dei reagenti:
-presenza di particelle e torbidità;
-assorbanza del bianco (A) a 505 nm ≥0.14.
LPL
Trigliceridi + H2O
Glicerolo + acidi grassi liberi
Glic.kinasi
Glicerolo + ATP
G3P + ADP
MATERIALE ADDIZIONALE
-Spettrofotometro o colorimetro che misuri a 505 (490-550) nm.
-Cuvette con cammino ottico di 1 cm.
-Attrezzatura generale di laboratorio.
GPO
G3P + O2
DAP + H2O2
POD
H2O2 + 4-AP + p-Clorofenolo
Chinone + H2O
CAMPIONI
Siero o plasma. Stabilità: i trigliceridi sono stabili per 5 gg. a 2-8°C.
L’intensità del colore formatosi è proporzionale alla conc. del
trigliceridi presente nel campione.
PROCEDIMENTO
1.Condizioni operative:
Lunghezza d’onda:
505 (490-550) nm
Cuvette :
cammino ottico 1 cm
T. costante:
15-25°C/37°C
2. Azzerare lo strumento contro acqua dist.
3. Pipettare in cuvetta:
SIGNIFICATO CLINICO
I trigliceridi sono dei grassi che forniscono energia alle cellule.
Come il colesterolo,essi sono trasportati alle cellule del corpo dalle
lipoproteine nel sangue.Una dieta con elevate quantità di acidi grassi
o carboidrati può innalzare i livelli dei trigliceridi.Gli aumenti dei
trigliceridi nel siero sono relativamente non-specifici. Per es.,una
disfunzione epatica risultante da epatite,ostruzione biliare extra
epatica o cirrosi,diabete mellito sono associati con un aumento dei
trigliceridi.
La diagnosi clinica non dovrebbe essere fatta sul risultato di un
singolo test;essa dovrebbe integrare i dati clinici e gli altri dati di
laboratorio.
WR (mL )
Standard (µL)
Campioni (µL )
GOOD pH 7.5
50 mmol/L
Tampone
p-Clorofenolo
2 mmol/L
R2
Lipoprotein lipasi (LPL)
Glicerolkinasi(GK)
Glicer.-3-ossidasi(GPO)
Enzimi
Perossidasi (POD)
Cal. Trigliceridi
Standard
1.0
10
----
Campione
1.0
---10
4. Mescolare e incubare 5 min. a 37°C o 10 min. a T.A.(15-25°C) .
5. Leggere l’Assorbanza (A) dei campioni e dello standard,contro il
bianco. Il colore è stabile per almeno 30 minuti.
REAGENTI
R1
Bianco
1.0
-------
CALCOLI
(A) camp. x 200 (conc. std.) = mg/dL trigliceridi nel campione
(A) std.
150000 U/L
500 U/L
Fattore di conversione: mg/dL x 0.0113=mmol/L.
2500 U/L
440 U/L
4-Aminofenaz. (4-AP)
0.1 mmol/L
ATP
0.1 mmol/L
Std.primario acquoso di
trigliceridi
200 mg/dL
CONTROLLO QUALITA’
Si consiglia di utilizzare dei sieri di controllo per monitorare le
performance del procedimento.
Se i valori dei controlli sono al di fuori del range definito,controllare
lo strumento,i reagenti e la tecnica per determinare i problemi.
Ciascun laboratorio dovrebbe stabilire un proprio schema di
Controllo di Qualità e le azioni correttive se i controlli non rientrano
nei limiti di tollerabilità.
PREPARAZIONE:
Reagente di lavoro (WR):
Ref:CH-69
Sciogliere ( )il contenuto del flacone di Enzimi R2 in un flacone da
50 mL di Tampone R1.
Ref:CH-70
Sciogliere ( )il contenuto del flacone di Enzimi R2 in un flacone da
125 mL di tampone R1.
Ref:CH-71
Sciogliere ( )il contenuto del flacone di Enzimi R2 in un flacone da
250 mL di tampone R1.
VALORI DI RIFERIMENTO
Uomini: 40-160 mg/dL
Donne: 35-135 mg/dL
Questi valori sono orientativi;ciascun laboratorio dovrebbe stabilire
un proprio intervallo di riferimento.
1
Rev. 0 Ed. 2007
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Tel. +39 081 3302705 Fax +39 081 3301453
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CARATTERISTICHE DEL METODO
1. Range di misura: dal limite di detenzione di 0.7 mg/dL al limite
di linearità di 1000 mg/dL. Se i valori ottenuti sono superiori al
limite di linearità,diluire il campione 1/2 con NaCl 9 g/L e
moltiplicare il risultato per 2.
2.
Precisione:
Media(mg/dL)
SD
CV (%)
Intra-assay (n=20)
118
216
0.67
0.94
0.60
0.43
Inter-assay (n=20)
119
215
2.17
2.91
1.83
1.36
2.
3.
Sensibilità : 1 mg/dL= 0.0012 A.
Accuratezza: i risultati ottenuti con i reagenti di questo kit (y)
non mostrano differenze sistematiche se comparati con altri
reagenti in commercio (x).
I risultati ottenuti usando 50 campioni danno i seguenti risultati:
Coefficiente di correlazione ( r ): 0.996.
Equazione della regressione: y= 1.00x + 0.0743.
I risultati delle caratteristiche dipendono dall’analizzatore utilizzato.
INTERFERENZE
Emoglobina fino a 10 g/L e Bilirubina fino a 170 µmol/L,non danno
interferenze.
Un elenco di farmaci ed altre sostanze che interferiscono con la
determinazione dei trigliceridi è stato riportato in letteratura da Young
e al.
NOTE
1.La calibrazione con standard acquoso può causare un errore
sistematico nelle procedure automatiche.In questi casi,si
raccomanda di usare un Calibratore serico.
2.Usare puntali monouso puliti per la dispensazione.
3. Sono disponibili su richiesta le metodiche applicative per i più
diffusi analizzatori automatici.
BIBLIOGRAFIA
1.Buccolo G et al. Quantitative determ. Of serum triglycerides by use of
enzymes.Clin.Chem. 1973;19 (5): 476-482.
2.Fossati P et al. Clin.Chem. 1982; 28(10):2077-2080.
3.Kaplan
A
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Triglycerides
Clin.Chem.The
C.V.
Mosby
Co.St.Louis.Toronto.Princeton 1984 ;437 and Lipids 1194-1206.
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4.Young DS. Effects of drugs on clin. Lab. test, 4 ed. AACC Press, 1995
5.Young DS. Effects of disease on clin. Lab. test, 4th ed. AACC Press, 2001.
6.Burtis A. et al. Tietz Textbook of Clin. Chem.,3rd ed. AACC 1999.
7.Tietz N.W. et al. Clin. Guide to Lab.Tests,3rd ed. AACC 1995.
CONFEZIONE TRIGLICERIDI
Ref.:
CH-69
Ref.:
CH-70
Ref.:
CH-71
Cont
Cont
Cont
: 9 x 50 mL
: 2 x 125 mL
: 4 x 250 mL
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