BD MacConkey Agar without Salt

ISTRUZIONI PER L'USO –
TERRENI SU PIASTRA
PRONTI PER L'USO
PA-256009.01
Rev.: Apr 2013
BD MacConkey Agar without Salt
USO PREVISTO
BD MacConkey Agar without Salt (agar MacConkey senza sale) è un terreno differenziale per
l'isolamento delle Enterobacteriaceae, degli stafilococchi e degli enterococchi da campioni clinici
come l'urina.
PRINCIPI E SPIEGAZIONE DELLA PROCEDURA
Metodica microbiologica.
L'agar MacConkey normale, ad es. BD MacConkey II Agar, viene usato per l'isolamento
selettivo delle Enterobacteriaceae e di alcuni organismi non fermentatori.1,2 L'inibizione dei
batteri Gram-positivi è dovuta principalmente alla presenza di cristalvioletto. A differenza degli
agar MacConkey normali, BD MacConkey Agar without Salt non inibisce i batteri Grampositivi, quali enterococchi e stafilococchi, dato che non contiene cristalvioletto.2
Le sostanze nutritive di BD MacConkey Agar without Salt sono fornite dai peptoni. I sali biliari
agiscono da deboli inibitori dei batteri non intestinali e contribuiscono a inibire la sciamatura del
Proteus. Il lattosio e il rosso neutro sono gli indicatori della fermentazione del lattosio. Su
entrambi i terreni si formano colonie da incolori all'arancione o rosa, a seconda della capacità
dell'isolato di fermentare il lattosio. La maggiore inibizione della sciamatura del Proteus è
dovuta all'assenza di sale. Pertanto questo terreno è consigliato in special modo per l'analisi
batteriologica quantitativa delle urine.
REAGENTI
Formule* per litro di acqua purificata
Peptoni
20,0 g
Lattosio
10,0
Sali biliari
5,0
Rosso neutro
0,075
Agar
12,0
pH
7,4 ± 0,2
*Formulazione aggiustata e/o supplementata per soddisfare i criteri prestazionali.
PRECAUZIONI
. Solo per uso professionale.
Non usare le piastre se presentano segni di contaminazione microbica, discromia,
essiccamento, crepe o altri segni di deterioramento.
Per dettagli su procedure di manipolazione asettica, biorischi e smaltimento di prodotti usati,
consultare le ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO.
CONSERVAZIONE E VITA UTILE
Alla consegna, conservare le piastre al buio a 2 – 8 °C nella confezione originale fino al
momento dell'uso. Evitare congelamento e surriscaldamento. Le piastre possono essere
inoculate sino alla data di scadenza (vedere l'etichetta della confezione) e incubate per i tempi
di incubazione raccomandati.
Le piastre prelevate da confezioni da 10 già aperte possono essere usate per una settimana, se
conservate in luogo pulito a 2 – 8 °C.
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CONTROLLO DI QUALITÀ A CURA DELL'UTENTE
Inoculare i campioni rappresentativi con i ceppi di seguito elencati (per informazioni più dettagliate,
vedere il documento ISTRUZIONI GENERALI PER L'USO). Incubare per 14 – 18 ore a 35 –
37 °C in atmosfera aerobica. Non incubare in atmosfera arricchita con anidride carbonica.
Ceppi
Escherichia coli
ATCC 25922
Proteus mirabilis
ATCC 12453
Salmonella typhimurium
ATCC 14028
Shigella flexneri
ATCC 12022
Enterococcus faecalis
ATCC 29212
Staphylococcus aureus
ATCC 25923
Non inoculati
Crescita
Colonie dal rosa al rosso; possono essere circondate da
zone di precipitazione biliare, terreno dal rosa al rosso
Colonie marrone chiaro, sciamatura inibita; terreno dal giallo
all'arancione
Colonie marrone chiaro, terreno dal giallo all'arancione
Colonie marrone chiaro, terreno arancione
Piccole colonie rossastre
Colonie rosa da piccole a medie
Arancione-rossastro, lievemente opalescenti
PROCEDURA
Materiali forniti
BD MacConkey Agar Without Salt, su piastre impilate Stacker da 90 mm.
Microbiologicamente controllato.
Materiali non forniti
Terreni di coltura accessori, reagenti e apparecchiature di laboratorio necessarie.
Tipi di campioni
BD MacConkey Agar Without Salt può essere utilizzato per tutti i tipi di campioni clinici, tuttavia
il suo utilizzo riguarda soprattutto le analisi delle urine (vedere anche CARATTERISTICHE
PRESTAZIONALI E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA). È possibile usare urina della
minzione o del catetere, oppure raccolta mediante puntura vescicale ipogastrica. Osservare le
tecniche asettiche per la raccolta dei campioni urinari. Strisciare l'urina direttamente sul terreno
non più tardi di 2 ore dopo la raccolta o conservarla in frigorifero (non oltre 24 ore) per evitare
l'eccessiva crescita di agenti infettivi o contaminanti prima dell'inoculazione del terreno.
Procedura del test
Prelevare un campione di urina miscelata e non diluita usando un'ansa calibrata (0,01 o 0,001
mL). Verificare il corretto caricamento dell'ansa. Inoculare il campione a metà della piastra su
una singola striscia e da qui estendere ulteriormente la diffusione dell'inoculo. 6-9
Se su questo terreno si effettua la coltura di campioni diversi dalle urine, eseguire lo striscio
per l'isolamento. In alternativa, se il materiale viene posto in coltura direttamente da un
tampone, passare il tampone su una piccola area del bordo e strisciare dalla zona inoculata
per isolare le colonie.
Si deve inoltre eseguire una coltura di tutti i campioni su una piastra di agar sangue, ad es. BD
Columbia Agar with 5% Sheep Blood, per rilevare isolati esigenti, che potrebbero non crescere
su BD MacConkey Agar Without Salt. Incubare la piastra di agar sangue in atmosfera aerobica
arricchita di CO2; incubare l'agar MacConkey in aria ambiente a 35 – 37 °C per 24 – 48 h.
Risultati
Dopo l'incubazione, i fermentatori del lattosio, ad es. l'E. coli, appariranno da rosa o rosa acceso
a rosso e possono essere circondati da un precipitato biliare torbido rosa. Gli organismi che non
fermentano il lattosio, ad es. Proteus spp., appariranno incolori. I non fermentatori del lattosio
possono modificare il colore del terreno in beige-giallastro, mentre la colorazione arancionerossastra passa a rosa acceso quando si verifica la crescita di fermentatori del lattosio. Gli
stafilococchi crescono su entrambi i terreni e producono colonie dal rosa chiaro al rosa, mentre
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gli enterococchi producono piccole colonie di colore rosso. Sono necessari ulteriori test
biochimici per l'identificazione definitiva degli isolati.
CARATTERISTICHE PRESTAZIONALI E LIMITAZIONI DELLA PROCEDURA
BD MacConkey Agar Without Salt è un terreno adatto all'isolamento di numerosi
microrganismi a crescita aerobica, ad es. Enterobacteriaceae, Pseudomonas e altri bacilli Gramnegativi non fermentanti, enterococchi, stafilococchi e molti altri organismi isolati dalle urine o da
altri campioni clinici e materiali non clinici come gli alimenti.2-6
Gli streptococchi e gli altri organismi che richiedono sangue o siero per svilupparsi potrebbero
non presentare alcuna crescita o una crescita insufficiente su questo terreno. Il campione,
pertanto, deve essere coltivato anche su una piastra di agar sangue o di agar cioccolato se si
prevede la presenza di tali organismi.
I patogeni genitourinari, quali Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, Chlamydia,
Ureaplasma o altri organismi esigenti non crescono su questo terreno. Consultare la bibliografia
per stabilire le tecniche di rilevamento più adatte a questi organismi.7-9
Benché sia possibile eseguire direttamente sul terreno la differenziazione in base alla
fermentazione del lattosio e altri test diagnostici, per completare l'identificazione sono
necessari test biochimici e, all'occorrenza, test immunologici con l'uso di colture pure.
È stato riscontrato che incubando piastre di agar MacConkey con arricchimento di CO2, la
crescita, e quindi il rilevamento, di diversi ceppi di bacilli Gram-negativi risulta ridotta.10
Sono necessari ulteriori test biochimici e/o sierologici per identificare gli isolati ottenuti su questi
terreni di coltura.
BIBLIOGRAFIA
1. MacConkey, A. 1905. Lactose-fermenting bacteria in feces. J. Hyg. 5:333-379.
2. MacFaddin, 1985. Media for the isolation-cultivation-identification-maintenance of medical
bacteria: Williams and Wilkins, Baltimore.
3. Hitchins, A. D., P. A. Hartman, and E. C. D. Todd. 1992. Coliforms-Escherichia coli and its
Toxins, p. 325-369. In C. Vanderzant, and D. F. Splittstoesser (ed.), Compendium of
methods for the microbiological examination of foods, 3rd ed. American Public Health
Association, Washington. D.C.
4. Food and Drug Administration. 1995. Bacteriological analytical manual, 8th ed. AOAC
International. Gaithersburg, MD.
5. WHO. 1963. International Standards for Drinking Waters, 7th ed., Churchill Ltd. London.
6. DGHM. 1983. Verfahrensrichtlinien für die mikrobiologische Diagnostik, chapter 2.1. Fischer
Verlag, Stuttgart, Germany.
7. Barry, A.L., P.B. Smith, and M. Turck. 1975. Cumitech 2, Laboratory diagnosis of urinary tract
infections. Coordinating ed., T.L. Gavan. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
8. Thomson, R.B., and J.M. Miller. 2003. Specimen collection, transport, and processing:
bacteriology. In: Murray, P. R., E. J. Baron, J.H. Jorgensen, M. A. Pfaller, and R. H. Yolken
(ed.). Manual of clinical microbiology, 8th ed. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
9. Clarridge, J.E., M.T. Pezzlo, and K.L. Vosti. 1987. Cumitech 2A, Laboratory diagnosis of
urinary tract infections. Coordinating ed., A.S. Weissfeld. American Society for Microbiology,
Washington, D.C.
10. Mazura-Reetz, G. T. Neblett, and J. M. Galperin. 1979. MacConkey Agar: CO2 vs. ambient
incubation. Abst. Ann. Mtg. American Society for Microbiology. C179.
CONFEZIONE/DISPONIBILITÀ
BD MacConkey Agar Without Salt
N. di cat. 256009
Terreni su piastra pronti per l'uso, confezioni da 20
N. di cat. 257286
Terreni su piastra pronti per l'uso, confezioni da 120
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ULTERIORI INFORMAZIONI
Per ulteriori informazioni, rivolgersi al rappresentante BD di zona.
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