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Selezione di un rilevante in vitro di cellule
modello per la prova e il confronto
gli effetti di un Choukroun's
fibrina ricco di piastrine (PRF) membrana
e un plasma ricco di piastrine (PRP)
gel: trucchi e le trappole
Al Direttore:
Recentemente abbiamo letto con grande interesse un articolo pubblicato nel OOOOE,
dove Egli et AL.1 provato a confrontare gli effetti in vitro sulla proliferazione e
differenziazione degli osteoblasti ratto indotta da un plasma ricco di piastrine (PR) e un
fibrina ricco di piastrine (PRF). Abbiamo un significativo esperienza con le colture cellulari
usando PRF, 2,3 e il metodo e la terminologia utilizzata da Lui et al. elevare
diverse domande che richiedono discussione.
Nel loro studio, Lui et al. ha deciso di incubare e PRF PRP in condizioni di coltura per 28
giorni e per raccogliere loro essudati a 5 volte sperimentale: 1, 7, 14, 21, e
28 giorni. Gli autori hanno poi testato gli effetti di questi essudati su colture cellulari. Il
vantaggio di questo approccio è quello di limitare le reazioni immunitarie interspecie tra
PRP umano / PRF e colture cellulari di ratto. Il problema è che gli autori hanno verificato
gli effetti del solo fattori di crescita e proteine in sospensione nella PRP /PRF essudato e
non gli effetti veri della fibrina tutto prodotto. Questa è una limitazione importante, perché è
PRF un denso a base di fibrina biomaterial4 solido con uno specifico architettura e il
contenuto della matrice cellulare (aggregati piastrinici, leucociti attivati), 5 e il suo essudato
è chiaramente non la parte più interessante del prodotto. Allo stesso modo, anche se la
maggior parte PRPS sono omogenei piastrinica liquido sospensioni, i loro non sono gli
essudati bioattivi unico componenti, perché si sono aggregati piastrinici e la loro gel di
fibrina associata anche innescare molti biologico mechanisms.6, 7. Per quanto riguarda il
PRP, gli autori hanno affermato di utilizzare il Curasan metodo (Kleinostheim, Germania),
ma purtroppo essi non valutare il contenuto di leucociti il loro ultimo product.8-10 Curasan
PRP è effettivamente classificato nei leucociti e plasma ricco di piastrine (L-PRP) di
famiglia. 4 leucociti sono giradischi del fattore di crescita rilascio e svolgono un ruolo
significativo nella biologia di queste products.11-14, inoltre, gli autori non hanno punto
come e quando hanno attivato il PRP (utilizzando trombina o Batroxobina), e sembra che il
PRP si in realtà non è mai attivato in un gel. Questo approccio è discutibile, perché il vero
prodotto finale utilizzato in pazienti è un gel di L-PRP (nella maggior parte dei casi), non
un piastrinica unactivated suspension.15, 16. Per quanto riguarda la PRF, ci sono
questioni molto gravi sul protocollo descritto da Lui et al. Infatti, il autori ha affermato di
utilizzare il "protocollo PCCS" (piastrine Concentrato Sistema di raccolta, 3I, Palm Beach
Gardens, FL, USA) per la produzione di PRF, e di cui il nostro propri riferimenti circa la
PRF technology.17, 18 I problema è che Choukroun la PRF non possono essere prodotti
con il dispositivo PCCS, perché quella centrifuga e i tubi sono specificamente progettati
per la produzione automatizzata di un L-PRP.8, 9 Inoltre, gli autori hanno sostenuto di
aver quantificato le piastrine in PRF, ma questo è impossibile. In effetti, il concetto di
produzione di PRF è basata sulla attivazione delle piastrine durante la centrifugazione
costituire fibrina forte / e filoni piastrine un denso finale PRF clot19, pertanto, esiste solo in
PRF una forma materiale solido, mai in forma liquida. Un accurato e la quantificazione
diretta del contenuto delle piastrine è impossibile e abbiamo dimostrato solo di recente e
indirettamente soustraction da che? il 95% delle piastrine del raccolta di sangue iniziale
sono stati fusi in PRF clot.5 Di conseguenza, non abbiamo un'idea chiara sul "PRF"
gli autori ha affermato di utilizzare nel loro studio. PRF è un libero e open-access
technique.20, tuttavia, il nome del PRF è un marchio registrato e fa riferimento ad uno
specifico kit di preparazione (centrifuga PC02 e kit di raccolta; Processo, Nizza, Francia),
processo di produzione, e finale prodotto. Questa protezione del marchio non è stato
eseguito per motivi industriali, ma di identificare con chiarezza la tecnica e proteggerlo
dalla confusione o malintesi scientifica. Perché non c'è nessun commerciale significativo
interesse per la vendita di dispositivi PRF, l'unico modo per proteggere PRF è stato quello
di costringere la gente a rispettare la definizione del prodotto e quindi a rispettare il
marchio. In questo articolo, sembra che il prodotto è stato testato un liquido concentrato
piastrinico prodotto con il PCCS e forse non è un originale Choukroun PRF. Particolare
attenzione deve da adottare per rispettare una chiara e affidabile per terminology4
evitare fraintendimenti significativi in letteratura. Infine, la prova in vitro gli effetti della vita
complessa biomateriale come coagulo PRF Choukroun o membrana richiede la massima
attenzione per ottenere risultati affidabili. Qualunque sia il metodo, è importante per
testare la PRF intero e non solo frammenti, 2 perché PRF presenta una specifica
architettura 3-dimensionale e cellule distribution.5 Inoltre, occorre prestare attenzione alle
sempre mantenere PRF in un mezzo
osmotico (come il terreno di coltura) per
preservare il contenuto della cella (leucociti in
particolare) dal deterioramento.
Nel loro studio, He et al. utilizzato un indiretto
interessante metodo per testare l'effetto del
essudati, ma no pensare che non prova
veramente il materiale completo come quello
usato nei pazienti. E 'quindi impossibile
tracciare importanti conclusioni con questa
metodologia specifica.
Dalla nostra esperienza, 2,3 una completa e
affidabile metodologia per testare in vitro gli
effetti cella di un PRP o di un PRF richiede:
Per usare le cellule umane in coltura primaria
dal donatore stesso che per il concentrato di
piastrine, per evitare immunitario reazioni
incrociate e altri pregiudizi connessi. Perché
Fig. 1. Cultura osteoblasti umani primari in
non è possibile produrre PRF nei ratti, topi le
contatto con un fibrina ricco di piastrine (PRF)
cellule dovrebbero essere evitato.
membrana in una piastra di coltura di grandi
Per introdurre il prodotto nel suo complesso
dimensioni (60 mm di diametro) dopo 21 giorni
attivato, come un PRP attivato gel o il
di cultura. La targa è stata trattati con Von
coagulo intero PRF o membrana, nella
Kossa colorazione noduli di mineralizzazione
piastra di coltura, per osservare le reazioni
mostra in nero. La membrana di PRF è stato
complesse
rimosso dopo 7 giorni,ma la sua traccia è ancora
e l'equilibrio tra le cellule coltivate e la
visibile al centro del piatto (punteggiata cenni).
biomateriale. Come mostrato in fig. 1, la
cultura piatto dovrebbe sempre essere grande abbastanza per ricevere una completa
coagulo (e anche alcuni grumi quando per testare una dose-dipendente
effetto) senza comprimere le cellule coltivate. In i nostri studi con PRF Choukroun, il 2,3
abbiamo sempre usato piastre di coltura con un diametro minimo di 60 mm, dando spazio
ad una piena interazione tra le cellule e biomateriale e consentendo l'espressione di vari
modelli di sviluppo delle cellule.
A considerare il ruolo chiave dei leucociti, quando present.14, 22, infatti, Curasan PRP e
Choukroun's PRF sono rispettivamente un PRP-L-L e un PRF4 e leucociti contengono.
Tutte le colture cellulari con prodotti da queste famiglie sono necessariamente cocultures
con i leucociti, come è stato recentemente published.2, 3 L'analisi dei risultati ottenuti con
PRP / PRF è quindi particolarmente complesso, ma anche veramente emozionante,
perché le interazioni biologiche e dei meccanismi di questi prodotti del sangue devono
ancora essere identificati e chiariti. modelli cellulari con PRF sono di interesse di
particolare rilievo, perché Choukroun di PRF è un sangue ottimizzato clot5:
tutti i modelli di cellulare con PRF sono anche indagini su il processo di guarigione dopo la
coagulazione, con un potenziale interesse al di là del campo stretto concentrati piastrinici
per uso chirurgico. Questo campo di ricerca, tuttavia, richiede a seguito di una rigorosa
terminologia e metodologia per evitare le trappole molti scientifica e le relative malintesi.
David M. Dohan Ehrenfest, DDS, PhD
Dipartimento di Biomateriali
Istituto di Scienze Cliniche
Sahlgrenska Academy, Università di Göteborg
Gothenburg, Svezia
Il LoB5 Fondazione per la ricerca
Parigi, Francia
Marco Del Corso, DDS
Private Practice, Torino, Italia
Dipartimento di Odontostomatologiche e
Maxillo-Facciale Scienze
Università Federico II di Napoli
Napoli, Italia
Francesco Inchingolo, MD, DDS, PhD
Dipartimento di Scienze chirurgiche e dentali
Università degli Studi di Bari
Bari, Italia
Charrier, Jean-Baptiste, MD, PhD
Dipartimento di Otorinolaringoiatria, Chirurgia del collo
Università di Paris Sud
AP-HP Ospedale Bicêtre Francia Le Kremlin Bicêtre,
Il LoB5 Fondazione per la ricerca
Parigi, Francia
RIFERIMENTI
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doi: 10.1016/j.tripleo.2010.05.056
Selezione di un rilevante in cellulari in vitromodello per la prova e il confronto
gli effetti di una plateletrich Choukroun fibrina (PRF) e di una membrana plasma
ricco di piastrine (PRP) del gel:
Trucchi e trappole
In risposta:
Abbiamo letto attentamente la lettera di David M. Dohan Ehrenfest et al. per quanto
riguarda il nostro articolo "A comparative studio di fibrina ricco di piastrine (PRF) e ricco di
piastrine plasma (PRP) sugli effetti della proliferazione e differenziazione
degli osteoblasti ratto in vitro ".
Noi rispettiamo il lavoro pionieristico Dr. Dohan Ehrenfest in PRF ricerca. Lo scopo del
nostro articolo era quello di valutare il modello di rilascio di fattori di crescita nel PRP e
PRF e dei loro effetti sulla proliferazione osteoblastica e differenziazione. Il nostro lavoro è
basato su Dr. Dohan studio di Ehrenfest che i fattori di crescita in PRF potrebbe
rilasciare progressivamente e che questo modello di rilascio è pensato per essere una
delle principali differenze tra PRP e PRF in biologico activity.1 Vorremmo fornire
i nostri materiali di studio dettagliato e rispondere al dottor Dohan Ehrenfest domande
come segue.
PERCHE 'NON essudati, PRF intero?
Nel 2007, quando abbiamo provato a studiare il modello di rilascio di PRF, non abbiamo
letto alcuno studio su fattore di crescita- rilasciando modelli di PRF con modelli essudato,
né relazioni sugli effetti delle cellule, quindi, non abbiamo potuto seguire qualsiasi
protocollo riportato dalla letteratura precedente per progettare il nostro lavoro. Infatti, il
nostro studio ha dimostrato i diversi modelli di rilascio di crescita derivato dalle piastrine
factor (PDGF), AB e fattore di crescita trasformante (TGF)? 1 in essudati di PRF e PRP.
Inoltre, abbiamo determinato i diversi effetti di essudato di PRP PRF e sulla proliferazione
e la differenziazione osteoblastica. I risultati del nostro studio ha mostrato che essudato di
OOOOE Volume 110, Numero 4 Lettere alla redazione 411
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