Saggio CEDIA® per la rilevazione del metabolita dell`eroina 6

Saggio CEDIA® per la rilevazione del metabolita
dell'eroina 6-monoacetil morfina (6-AM)
Per uso diagnostico in vitro
100107 (3 x 17 mL)
10015213 (3 x 17 mL Indiko Kit)
100108 (65 mL Kit)
100186 (495 mL Kit)
Uso previsto
PERICOLO: Il reagente in polvere contiene ≤ 55% p/p di albumina sierica bovina (BSA) e ≤ 1%
p/p di Sodio azide. Il reagente liquido contiene ≤ 0,5% p/p di siero bovino (FBS), ≤0,15% di Sodio
azide e < 0,1% di anticorpi farmaco-specifici (topo).
H317 - Può provocare una reazione allergica cutanea.
H334 - Può provocare sintomi allergici o asmatici o difficoltà respiratorie se inalato.
EUH032 - A contatto con acidi libera gas molto tossici.
Il saggio garantisce soltanto un risultato analitico preliminare. Utilizzare un metodo chimico
alternativo più specifico a conferma del risultato analitico. La gas cromatografia o la
spettrometria di massa (GC/MS) costituiscono il metodo di conferma d'elezione.1 Avvalersi
di considerazioni cliniche e del giudizio professionale per interpretare i risultati di qualsiasi
test sull'uso o l'abuso di droghe soprattutto quando si utilizzano risultati positivi preliminari.
Non respirare polveri, nubi, vapori e spray. Gli indumenti da lavoro contaminati non devono
essere portati fuori dal luogo di lavoro. Indossare guanti protettivi/Proteggere gli occhi/il viso.
In caso di ventilazione insufficiente utilizzare un apparecchio respiratorio. In caso di contatto
con la pelle: lavare abbondantemente con acqua e sapone. IN CASO DI INALAZIONE: se la
respirazione è difficile, trasportare l’infortunato all’aria aperta e mantenerlo a riposo in posizione
che favorisca la respirazione. In caso di irritazione o eruzione della pelle: consultare un medico.
In caso di sintomi respiratori: contattare un CENTRO ANTIVELENI o un medico. Lavare gli
indumenti contaminati prima di indossarli nuovamente. Smaltire il prodotto/recipiente nelle
apposite aree in conformità alla regolamentazione locale/regionale/nazionale/internazionale.
IIl saggio CEDIA® per la rilevazione del metabolita dell’eroina 6-monoacetil morfina (6-AM)
è una metodologia immunoenzimatica in fase omogenea per la determinazione qualitativa
e semiquantitativa in vitro del metabolita dell’eroina (6-AM) nell’urina umana ottenuta
con analizzatori chimici clinici automatizzati. Le misurazioni sono utilizzate quale aiuto per
l'identificazione dell'uso o dell'abuso di eroina (overdose).
Riepilogo e presentazione del test
L'eroina (3,6-diacetilmorfina) viene prodotta per modificazione chimica della morfina, un
alcaloide reperibile in natura nelle capsule immature del papavero da oppio (Papaver
somniferum).2,3 L'eroina induce forte assuefazione ed è classificata come sostanza appartenente
al gruppo I (per cui è bandito ogni uso farmacologico). L'eroina è il derivato dell'oppio di cui si
fa maggiore abuso,4,5 e il suo uso è associato ad un'ampia gamma di problemi sanitari. Si
somministra per endovena, con un'iniezione sottocutanea o si sniffa.3 Viene rapidamente
metabolizzata (ha emivita di 9 minuti) in 6-AM dalle esterasi presenti nel sangue, quindi per
idrolisi in morfina nel fegato.
La presenza di 6-AM nell'urina è considerata un marcatore specifico per l'uso illecito di eroina. 6-8
Il 6-AM non si forma per acetilazione della morfina nell'organismo; la presenza perciò di 6-AM
non può essere causata dall'iniezione di analgesici oppiacei legali o dall'assunzione di grosse
quantità di semi di papavero da oppio. Per questo motivo, il Department of Health and Human
Services, (DHHS, Ministero della sanità e dei servizi sociali) ha introdotto linee direttive aggiornate
per i test sugli oppiacei che prevedono l'obbligo di test per il 6-AM per tutti i campioni di urina
risultati positivi agli oppiacei per poter confermare l'abuso di eroina.9 L'emivita del 6-AM è di
circa 35 minuti. Il tempo per cui la misurazione del 6-AM è indice diagnostico affidabile di uso di
eroina dipende dal quantitativo di eroina assunto. È probabile che anche per dosi più elevate di
eroina il tempo di rilevamento sia limitato alle 24 ore successive all'assunzione.6
Il saggio CEDIA per la rilevazione del metabolita dell'eroina utilizza la tecnologia del DNA
ricombinante (brevetto USA N° 4708929) per produrre un sistema di immunodosaggio
unico in fase omogenea.10 Il saggio si basa sull'enzima batterico -galattosidasi, frazionato
geneticamente in due frammenti inattivi chiamati Enzima accettore (EA) ed Enzima donatore
(ED). I due frammenti si riassociano spontaneamente per formare un enzima interamente
attivo che, nel formato del saggio, è in grado di scindere un substrato, dando così luogo ad una
reazione colorimetrica misurabile mediante spettrofotometria.
Nel saggio CEDIA per la rilevazione del metabolita dell'eroina, il campione è in concorrenza
con il 6-AM coniugato all'ED per i siti di legame dell'anticorpo. Se il 6-AM è presente
nel campione, si lega all'anticorpo, lasciando il coniugato ED-6-AM libero di riassociarsi
con l'EA per formare -galattosidasi attiva. Se invece il campione non contiene 6-AM,
l'anticorpo si lega al coniugato ED-6-AM, inibendo la riassociazione dei frammenti di
-galattosidasi inattivi e riducendo in tal modo la quantità di enzima attivo formato. L'ammontare
dell'enzima attivo formato e il cambiamento di assorbanza risultante sono proporzionali alla
quantità di 6-AM presente nel campione.
Reagenti
1 Tampone di ricostituzione EA: contiene 0,32 mg/L di anticorpi monoclonali per
6-monoacetilmorfina, sali tampone, detergente e conservante.
1a Reagente EA: contiene 0,171 g/L di enzima accettore, sali tampone, detergente e
conservante.
2 Tampone di ricostituzione ED: contiene sali tampone e il conservante.
2a Reagente ED: contiene 16,2 µg/L di enzima donatore coniugato con 6-monoacetilemorfina,
1,67 g/L di rosso di clorofenolo- -D-galattopiranoside, uno stabilizzatore e un
conservante.
Materiali aggiuntivi: etichette aggiuntive con codice a barre (N° cat. 100107 e 100108.
Per le istruzioni per l'uso, consultare la documentazione dell'analizzatore per la specifica
applicazione). Flaconi vuoti analizzatore per le soluzioni EA/ED (N° cat. 100108). Flaconi vuoti
analizzatore per soluzioni ED (solo Cat. N° 1000186).
Materiali aggiuntivi occorrenti (venduti separatamente):
1557416
1661388
100031
100034
100202
Calibratore negativo CEDIA, 5 mL
Calibratore negativo CEDIA, 10 mL
Calibratore di cutoff CEDIA per metabolita dell'eroina (6-AM), 5 mL
Calibratore alto CEDIA per metabolita dell'eroina (6-AM), 5 mL
Set di controllo MGC Select, 3 x 5 mL
Precauzioni e avvertenze
1.Questo test è unicamente per uso diagnostico in vitro. I reagenti sono dannosi se
ingeriti.
2.Non utilizzare i reagenti oltre la data di scadenza.
Preparazione e conservazione dei reagenti
Per la preparazione delle soluzioni da utilizzare con gli analizzatori Hitachi, vedere la sezione
seguente. Per tutti gli altri analizzatori, fare riferimento alla documentazione dell'analizzatore
per la specifica applicazione.
Estrarre il kit dal frigo subito prima della preparazione delle soluzioni.
Preparare le soluzioni nell'ordine seguente onde ridurre al minimo il rischio di contaminazione:
Soluzione dell'enzima donatore R2: collegare il flacone 2a (reagente ED) al flacone 2 (tampone
di ricostituzione ED) utilizzando uno degli adattatori acclusi. Miscelare capovolgendo
delicatamente, verificando che tutto il materiale liofilizzato del flacone 2a venga trasferito nel
flacone 2. Evitare la formazione di schiuma. Staccare il flacone 2a e l'adattatore dal flacone 2
ed eliminare. Tappare il flacone 2 e lasciar riposare per circa 5 minuti a temperatura ambiente
(15–25 °C). Miscelare di nuovo. Registrare la data di ricostituzione sull'etichetta del flacone.
Soluzione dell'enzima accettore R1: collegare il flacone 1a (reagente EA) al flacone 1
(Tampone di ricostituzione EA) utilizzando uno degli adattatori acclusi. Miscelare capovolgendo
delicatamente, verificando che tutto il materiale liofilizzato del flacone 1a sia trasferito nel
flacone 1. Evitare la formazione di schiuma. Staccare il flacone 1a e l'adattatore dal flacone 1
ed eliminare. Tappare il flacone 1 e lasciar riposare per circa 5 minuti a temperatura ambiente
(15–25 °C). Miscelare di nuovo. Registrare la data di ricostituzione sull'etichetta del flacone.
N° cat. 100108-Analizzatore Hitachi 717, 911, 912 o 914: trasferire i reagenti ricostituiti nei
flaconi vuoti corrispondenti R1 e R2 da 100 mL forniti con il kit. Hitachi 917/sistema analitico
P modulare: utilizzare i reagenti ricostituiti senza trasferire il contenuto dei flaconi. Eliminare
i flaconi da 100 mL vuoti.
N° cat. 100186-Analizzatore Hitachi 747/Sistema analitico modulare D: utilizzare l'imbuto
fornito per trasferire una parte della soluzione R2 nel flacone vuoto della soluzione R2 fornito e
correttamente etichettato.
NOTA 1: i componenti forniti nel kit sono da usare come un'unica unità. Non miscelare
componenti provenienti da lotti differenti.
NOTA 2: evitare la contaminazione crociata dei reagenti verificando che i tappi reagente
corrispondano al relativo flacone. La soluzione R2 deve essere di colore giallo-arancione. Una
colorazione rosso scuro o rosso-porpora indica l'avvenuta contaminazione del reagente che
deve pertanto essere eliminato.
NOTA 3: prima di condurre il saggio, le soluzioni R1 e R2 devono essere alla temperatura del
comparto di conservazione del reagente dell'analizzatore. Per informazioni in merito, consultare
la documentazione specifica dell'analizzatore.
NOTA 4: al fine di assicurare la stabilità della soluzione EA ricostituita, proteggere dall'esposizione
continua e prolungata a luce intensa.
Conservare i reagenti a 2–8 °C. NON CONGELARE. Per la stabilità dei componenti non aperti,
leggere la data di scadenza sulle etichette della confezione o del flacone.
Soluzione R1: 60 giorni refrigerata sull'analizzatore o a 2–8 °C.
Soluzione R2: 60 giorni refrigerata sull'analizzatore o a 2–8 °C.
Raccolta e preparazione del campione
Raccogliere i campioni di urina in contenitori puliti di vetro o di plastica. Centrifugare i campioni
molto torbidi prima del test. Trattare l'urina umana come materiale potenzialmente infetto.
Raccogliere un altro campione da saggiare se se ne sospetta la contraffazione. La diluizione dei
campioni di urina può inficiare i risultati del test.
The Mandatory Guidelines for Federal Workplace Drug Testing Programs: Final Guidelines:
Notice (Linee direttive inderogabili per i programmi di test tossicologici sui luoghi di lavoro
federali - linee direttive finali: avviso) raccomandano di refrigerare i campioni non saggiati entro
7 giorni dalla data di arrivo al laboratorio in unità di refrigerazione sicure.9
Procedimento
Per l'esecuzione del saggio si possono usare analizzatori chimici in grado di mantenere una
temperatura costante, pipettare i campioni, miscelare i reagenti e misurare i tassi enzimatici e i tempi
di reazione con accuratezza. La documentazione relativa all'applicazione con i parametri specifici
per lo strumento è reperibile presso Microgenics, appartenente al gruppo Thermo Fisher Scientific.
Controllo della qualità e calibrazione11
Specificità
I seguenti precursori, metaboliti e composti strutturalmente correlati, se saggiati con il test
CEDIA per la rilevazione del metabolita dell'eroina (6-AM), hanno dato luogo a risultati negativi
per il calibratore di cutoff (10 ng/mL):
Analisi qualitativa
Per l'analisi dei campioni, utilizzare il calibratore di cutoff CEDIA per il metabolita dell'eroina
(6-AM). Per tutti gli altri analizzatori, fare riferimento alla documentazione dell'analizzatore per
la specifica applicazione.
Analisi semiquantitativa
Per l’analisi semiquantitativa dei campioni, utilizzare il calibratore negativo CEDIA e il calibratore
di cutoff CEDIA per il metabolita dell’eroina per l’analisi dei risultati. Per tutti gli altri analizzatori,
consultare il foglio applicativo relativo all’analizzatore in dotazione. Ripetere la calibrazione
del test se i reagenti vengono sostituiti o se i risultati di controllo sono esterni ai limiti stabiliti.
Composto
La buona pratica di laboratorio raccomanda di eseguire i controlli lo stesso giorno in cui si
saggiano i campioni dei pazienti ed ogni volta che si procede alla calibrazione. Si consiglia di
eseguire due controlli: un controllo positivo e uno negativo. Basare la valutazione del controllo
di qualità sui valori ottenuti nei controlli che devono ricadere entro limiti specifici. Se si rilevano
tendenze o mutamenti subitanei dei valori, riesaminare tutti i parametri operativi. Rivolgersi al
Servizio di assistenza tecnica alla clientela per ulteriore assistenza. Tutti i requisiti di controllo
di qualità devono essere eseguiti in conformità con i regolamenti locali, regionali e/o statali o
con i requisiti di accreditamento vigenti.
Risultati qualitativi
Il calibratore di cutoff (10 ng/mL) CEDIA per il metabolita dell'eroina (6-AM) è utilizzato come
riferimento per distinguere i campioni positivi da quelli negativi. I campioni che producono
un valore di risposta uguale o superiore al valore della risposta del calibratore di cutoff sono
considerati positivi. I campioni che producono una risposta di valore inferiore a quella del
calibratore di cutoff sono considerati negativi. Per ulteriori informazioni in merito, consultare la
documentazione specifica dell'analizzatore.
Limitazioni
1. Un risultato positivo del test indica la presenza di 6-AM; non indica però, né misura il
grado d'intossicazione.
2. Vi è inoltre la possibilità che altre sostanze e/o fattori (ad es. errori tecnici o procedurali)
possano interferire con il test causando falsi risultati.
Caratteristiche prestazionali specifiche
I risultati prestazionali tipici ottenuti sull'analizzatore Hitachi 717 sono riportati in basso.12 I
risultati conseguiti nel proprio laboratorio potrebbero differire.
Precisione
Gli studi di precisione della misura, condotti utilizzando i reagenti, i calibratori e i controlli
confezionati hanno dato luogo ai seguenti risultati espressi in mA/min con un analizzatore
Hitachi 717 che aderiva al seguente esperimento NCCLS di repliche modificate (6 repliche due
volte al giorno per 10 giorni).
100.000
Diidrocodeina
500.000
Idrocodone
300.000
Idromorfone
10.000
Imipramina
200.000
Levorfanolo
10.000
Meperidina
800.000
Precisione totale
% CV
Controllo basso (7,5 ng/mL)
437 + 5,2
1,2
437 + 6,4
1,5
Cutoff
467 + 5,5
1,2
467 + 8,0
1,7
Controllo alto (12,5 ng/mL)
494 + 5,5
1,1
494 + 8,3
1,7
Media + SD
(mA/min)
% CV
Hitachi 717 semiquantitativo
Precisione intrasequenza
Precisione totale
Media + SD
(Standard
deviation,
Deviazione
standard)
(mA/min)
% CV
Media + SD
(mA/min)
% CV
Controllo basso (7,5 ng/mL)
7,6 + 0,41
5,32
7,6 + 0,49
6,41
Cutoff
9,9 + 0,42
4,27
9,9 + 0,53
5,32
Controllo alto (12,5 ng/mL)
12,0 + 0,43
3,55
12,0 + 0,54
4,49
600.000
Morfina-6-glucuronide
600.000
Nalorfina
7.000
Naloxone
300.000
Naltrexone
300.000
Norcodeina
600.000
Normorfina
30.000
Ossicodone
400.000
Ossimorfone
80.000
+
-
189
0
46
*Il campione conteneva 10,7 ng/mL di 6-monoacetil morfina in base alla GC/MS.
2
Concentrazione
(ng/mL)
85.000
Fenciclidina (PCP)
10.000
Fenobarbital
500.000
30.000
Acido acetilsalicilico
500.000
Fluoxetina
500.000
Acido salicilurico
500.000
Ibuprofene
500.000
Aloperidolo
100.000
Idroxizina
500.000
Amitriptilina
500.000
Levotiroxina
Amoxicillina
500.000
Metadone
500.000
Benzoilecgonina
100.000
Metanfetamina
500.000
Benztropina metansolfonato
500.000
Nifedipina
500.000
75.000
50.000
Nordiazepam
100.000
Caffeina
500.000
Oxazepam
250.000
Captopril
500.000
Paracetamolo
500.000
Cimetidina
500.000
Perfenazina
150.000
Clordiazepossido
100.000
Prociclidina
800.000
10.000
Propossifene
100.000
Desipramina
500.000
Protriptilina
200.000
Diazepam
100.000
Ranitidina
500.000
Secobarbital
500.000
Difenidramina
1*
Composto
11-nor- 9-tetraidrocannabinolo
(THC-COOH)
Clorpromazina
Saggio
CEDIA
6-AM su Hitachi
+
-
Concentrazione
(ng/mL)
10, 11 di-idrocarbamazepina
Bromfeniramina
Accuratezza
Sono stati saggiati 206 campioni di urina in totale con il saggio CEDIA per la rilevazione del
metabolita dell'eroina (6-AM) sull'analizzatore Hitachi 717 utilizzando la gas cromatografia/
spettrometria di massa (GC/MS) come riferimento. I risultati ottenuti sono stati i seguenti:
GC/MS
9.000
Morfina-3-glucuronide
Composto
Precisione intrasequenza
80
Alcuni composti strutturalmente non correlati sono stati saggiati con il test CEDIA per la
rilevazione del metabolita dell'eroina (6-AM) ed hanno avuto esito negativo se saggiati alle
concentrazioni sottoelencate.
Hitachi 717 qualitativo
Utilizzando il calibratore di
cutoff di 10 ng/mL
Destrometorfano
Morfina
Risultati semiquantitativi
È possibile utilizzare il calibratore di cutoff CEDIA per metabolita dell’eroina (6-AM) insieme al
calibratore negativo CEDIA DAU per stimare la concentrazione relativa di 6-monoacetil morfina.
Per informazioni dettagliate, consultare il foglio applicativo relativo all’analizzatore in dotazione.
Prestare attenzione nella refertazione dei risultati della concentrazione poiché esistono molti
altri fattori che possono influenzare un test delle urine.
Utilizzando il calibratore di
cutoff di 10 ng/mL
500.000
Eroina idrocloridrica (HCl)
Risultati e valori attesi
Media + SD
(Standard
deviation,
Deviazione
standard)
(mA/min)
Concentrazione saggiata ( ng/mL)
Codeina
50.000
Digossina
100.000
Triprolidina
50.000
Doxepina HCl
100.000
Verapamil
500.000
Enalapril
500.000
Interferenza
Bibliografia
Non sono state osservate interferenze imputabili alle seguenti sostanze aggiunte alle
concentrazioni endogene normali che di ritrovano nell'urina se saggiate con il saggio CEDIA
per la rilevazione del metabolita dell'eroina (6-AM):
Sostanza
Concentrazione
Acetone
< 1,0 g/dL
Etanolo
Acido ascorbico
< 1,5 g/dL
Galattosio
Acido ossalico
< 0,1 g/dL
Albumina sierica umana
< 0,5 g/dL
Glucosio
Cloruro di sodio
< 6,0 g/dL
Riboflavina
< 0,5 g/dL
Urea
Creatinina
Emoglobina
Sostanza
−globulina
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11.Data on traceability are on file at Microgenics Corporation, a part of Thermo Fisher
Scientific.
12.Data on file at Microgenics Corporation, a part of Thermo Fisher Scientific.
Concentrazione
< 1,0 g/dL
< 10 mg/dL
< 0,5 g/dL
< 1,0 g/dL
< 7,5 mg/dL
< 2,0 g/dL
< 0,3 mg/dL
Microgenics Corporation
46500 Kato Road
Fremont, CA 94538 USA
Servizio di assistenza tecnica
e alla clientela USA:
1-800-232-3342
Thermo Fisher Scientific Oy
Ratastie 2, P.O. Box 100
01621 Vantaa, Finland
Tel: +358-9-329100
Fax: +358-9-32910300
Per gli aggiornamenti del foglio illustrativo, visitare:
www.thermoscientific.com/diagnostics
Negli altri paesi:
Rivolgersi al rappresentante Thermo Fisher Scientific locale di fiducia.
CEDIA è un marchio depositato di Roche Diagnostics. Tutti gli altri marchi sono di proprietà di
Thermo Fisher Scientific e delle sue affiliate.
10006723-7-IT
2015 09
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