Veloce. Accurata. Specifica. IDEXX RealPCR™

Transcript

Il team del reparto di biologia molecolare
presso IDEXX Vet·Med·Lab
Profili PCR: flessibili e convenienti
I profili preassemblati e gli esami singoli
Create il vostro profilo PCR
IDEXX Vet·Med·Lab offre, oltre ai singoli test di PCR quantitativa, anche profili progettati in modo specifico per una serie
di sintomi clinici. Questi includono sistemi di test multipli e
possono essere effettuati su un singolo campione del paziente.
Troverete una descrizione dei profili PCR attualmente disponibili, come ad esempio i profili diarrea per cane e gatto,
nel Listino prezzi in vigore.
Scegliendo più esami PCR per le malattie infettive
(massimo 8) in base alle esigenze specifiche del paziente,
viene applicato uno sconto secondo la tabella che trovate
nel Listino Prezzi in corso .
Sono inclusi tutti gli esami per la ricerca di agenti eziologici
tramite PCR la cui richiesta deve essere contemporanea e
sullo stesso modulo.
La diagnostica molecolare rappresenta da sempre una
componente fondamentale dei servizi forniti da IDEXX
Vet·Med·Lab. Nel corso degli anni, quello che inizialmente era
un piccolo reparto è cresciuto fino a diventare una grande
unità che sviluppa e ottimizza continuamente nuovi sistemi
di analisi basati sulle più recenti conoscenze acquisite nella
scienza veterinaria attraverso la collaborazione globale tra i
laboratori di riferimento IDEXX e il gruppo IDEXX R&D.
Il team responsabile delle analisi e della refertazione
include i seguenti collaboratori:
Profili PCR e relativi vantaggi
Nome del proprietario
Informazioni specifiche
Informazione
Via
IDEXX Vet·Med·Lab
C.A.P., località, provincia (solo se la fattura va intestata al proprietario)
Ricerca di agenti
patogeni tramite PCR
Codice fiscale
71
Le probabilità di formulare una diagnosi corretta aumentano grazie all’analisi simultanea di tutti i patogeni
pertinenti a un quadro clinico specifico. Si possono
identificare le coinfezioni con un unico passaggio.
68
67
54
65
64
52
63
51
62
50
61
49
60
48
59
47
58
46
T OXP
39
38
37
36
35
Cane
143
Gatto
T GE VP
T T FP
Coniglio
Cavallo
140
Bovino
139
Pecora
138
Capra
137
Suino
136
Volatile
135
altro:
H C M2
H C MR
Toxoplasma
gondii (DNA)
Pu
Zecke
[Va, non feci]
FD
Tritrichomonas foetus (DNA)
PK D
PV-3
44
43
PV-4
42
[F, EB]
FUC H S
235
maschio
Profilo volatili III
[F, EB]
234
femmina
Profilo volatili I + determin. del sesso
H YPP
233
castrato
Profilo volatili IV [F, EB + Ab , K]
Profilo volatili III + Cp. psittaci,
41
30
29
28
27
26
Anaplasma spp. (DNA)
B AB FP
Babesia felis (DNA)
39
23
22
21
B O RN AG
B O RRG
B RUC SP
18
17
16
15
12
09
06
03
02
01
E H V1 4
E H V1 4
[EB]
E H V5
[EB]
E“modulo
I VP
Brucella spp. (DNA)
33
[Va]
31
FSME P
GI ARSP
Coronavirus enterico canino
28
CECoV (RNA)
[K, Ab]
C H V1
C I VP
27
LAWI P
Herpesvirus can. CHV-1 (DNA) [Va]
Lawsonia intracellularis (DNA) [K]
Abbreviazioni:
aspiraatLeishmania
25
C H LVP
C RYPN P
[ATr]
Chlamydia felis (DNA)
[Ab]
[KM]
[F]
19
C. psitacci (DNA)
17
Ehrlichia canis (DNA)
Ehrlichia spp. (DNA)
[K]
[Ab,[Li]
K]
13
E ADV1
E AVP
12
Adenovirus equino 1 (DNA)
11
Arterite virale equina (RNA)
1
2
4
8
Beauceron Sheepdog, Pit Bull
[EB]
GLO B Z
Sindrome Overo Lethal White [EB]
MUH 7
Profilo occhi gatto
Pecora
8
Chlamydophila felis, Calicivirus FCV, Herpesvirus FHV-1, Mycoplasma felis
2
[EB]
PYRD _ B
Deficienza di piruvatochinasi – Basenji, Cairn Terrier
Profilo diarrea gatto – Tritrichomonas
[K]grave) – Jack Russell Terriery
SC I D _ T foetus, Giardia spp.,
SCID (immunodeficienza combinata
perfringens alpha Toxin-gene (quantitativo),
VWFGE N 1Clostridium perfringens Enterotoxin-gene
Tipo 1: German Pinscher, Dobermann, Barbone, Manchester Terrier,
(quantitativo), Coronavirus felino FCoV, Parvovirus felino FPV
Bovaro Bernese, Doberman Pincher, Welsh Corgi, Drentsche Patrijshond,
Profilo mal. trasmesse da artropodi 1 (cane)
[EB]
[EB]
[EB]
[EB]
[EB]
[EB]
Profilo mal. trasmesse da artropodi
[zecca]
VWFGE N 3 2 (cane)
Tipo 3: Scotch Terrier, Sheltie, Kooikerhondje
Profilo mal. trasmesse da artropodi 1+ Borrellia burgd. s. l., Encefalite da puntura di zecca
PO AP
XSC I D
X linked SCID – Welsh Corgi, Basset Hound
Profilo malattie respiratorie cavalli Ulteriori test e ulteriori razze su richiesta.
[ANa]
EHV-1, EHV-4, Arterite virale equina, Influenza virale equina
PO AF
Profilo malattie respiratorie puledri
[ANa + ATr]
Data Profilo malattie respiratorie cavalli + Rhodococcus
Timbro
equie firma del veterinario
4
[EB]
[EB]
Papillon, Coton de Tuléar, Kerry
Blue Terrier
Anaplasma spp., Babesia spp., Ehrlichia
spp.,
VWFGE
N 2 Hepatozoon canis
Tipo 2: German Wirehaired/Shorthaired Pointer
PZ
[Ab]
1
[K]
[EB]
Silky terrier, Austr. Stumpy Tail cattle dog, Mini Australische Shephard, Wäller, Cockapoo,
PRA-I
rcd1-PRA – Setter Irlandese
PFH M
Profilo
micoplasmi
PRA-R
Ipertermia
maligna
suina emotrofi
[EB] gatto
rcd2-PRA – Collie
[EB]
0
[EB]
[Ab]
Chlamydophila felis, Mycoplasma felis, FHV-1
PZB
[EB]
[EB]
[EB]
Consulenza specialistica per i veterinari
al numero verde 800 917 940 opz 1
8
09
08
07
06
05
La tecnologia PCR quantitativa ci consente di offrire
i profili ad un prezzo molto vantaggioso.
* Tempo richiesto per i profili dei volatili che includono anche la determinazione del sesso: una settimana.
04
03
02
0
1
2
4
8
0
1
2
4
8
0
1
2
Dr. med. vet. Alexandra Baur
Medico veterinario, Vicedirettore
di Dipartimento alla Justus-LiebigUniversität di Gießen in virologia.
Dal 2001 al 2004 ha collaborato
al programma di formazione per
la ricerca in medicina molecolare
veterinaria presso la Justus-LiebigUniversität. Dal 2006 lavora presso
IDEXX Vet·Med·Lab.
[EB]
Scrapie
Golden Doodle, Cane da orso della Carelia, Labradoodle, Labradoodle australiano,
PO AK
Profilo viegenetica)
respiratorie
superiori gattoMarkiesje, Barbone medio, Norwegian[Ab]
(predisposizione
[EB]
Elkhound, Yorkshire Terrier
[Va]
animali sopra Prosegue
descritti.sul retro del foglio
4
[Li]
Julia Reckfort tecnico di laboratorio veterinario, Sandra Zimmermann tecnico
di laboratorio medico, Timea von zur Gathen tecnico sanitario di laboratorio biomedico, Olga Kim ingegnere biotecnologico, Elena Mankov tecnico di laboratorio biotecnologico, Natasa Tomic tecnico di laboratorio biotecnologico, Cristina
Solana Tous tecnico sanitario di laboratorio biomedico, (Katja Landgraf tecnico
di laboratorio veterinario)
Dr. rer. nat. Jörg Balzer
Chimico, MSc, Direttore di Dipartimento dottorato alla Philipps
Universität di Marburg in biochimica, attività di ricerca post-dottorato
sull’espressione e la regolazione
genica presso CSIRO, Sydney, Australia e Institute of Plant Genetics
and Crop Plant Research, IPK Gatersleben. Dal 1998 lavora presso
Springer Spaniel Inglese, Cocker Spaniel Americano ed incroci
Fattore di von Willebrand:
tampone senza terreno di trasporto
2
[EB]
[EB]
Deficienza di fosfofruttochinasi
Crpytosporidium spp., Toxoplasma gondii, Salmonella sp. (patogeno), Clostridium
MYT UP
1
[EB]
Mucopolisaccaridosi VII – Pastore Tedesco
cord1-PRA
[EB]
Mycoplasma felis (DNA)
[EB]
Miopatia congenita (CNM, HMLR, LRM) – Labrador Retriever
C D PP
Profilo diarrea cane – Giardia spp.,
Cryptosporidium spp.,
PRA-P
prcd-PRA
Bovino
FD PP
Cand. M. haemominutum
turicensis (DNA)
liquido sinoviale
[EB]
[EB]
Salmonella sp. (patogeno), Clostridium perfringens
alpha
Toxin-gene
(quantitativo),
Austr.
Cattle
Dog, American
Cocker Spaniel, American Eskimo, Chesapeake Bay Retriever,
BLAD (Bovine
Leukocyte
perfringens Enterotoxin-gene (quantitativo),
Coronavirus
enterico
canino
Chinese Crested,
Cocker
Spaniel
inglese, Bovaro del Entlebucher, Golden Retriever,
AdhesionClostridium
Deficiency)
[EB]
[Va]
Mycoplasma
tamponeCand.
con terreno
di trasporto
MYO LR
Bartonella spp., Borrelia burgdorferi sensu
PRA-Clato, Cimurro CDV (qualitativo),
Mycoplasma haemofelis, Cand. Mycoplasma haemominutum, Cand. Mycoplasma turicensis
[EB, KM]
Leptospira spp. (DNA)
Mycoplasma haemocanis (DNA)
[EB]
Cand. M.dihaematoparvum
In caso di richiesta
test genetici la pre(già Haemobartonella
canis) [EB]
ghiamo di firmare
nello spazio sottostante
Affermo di aver controllato l‘identità degli animali
[Ab] MYC O PC R Mycoplasma spp. (DNA)
[Va]
testati e che i campioni sono stati prelevati dagli
0
[EB]
Leucodistrofia delle cellule globoidi – West Highland White Terrier, Cairn Terrier [EB]
Pinto, Quarter
Thoroughbread,superiori
ProfiloHorse,
vie respiratorie
cane
[Ab]
MYO C
Miotonia congenita – Schnauzer Nano
American Miniature Horse, Mustang,
Adenovirus canino tipo 2, HerpesvirusN Bcanino
CHV-1, Parainfluenzavirus canino,
BB
Cecità
notturna (CSNB) – Briard
Arabo ed incroci
Influenzavirus canino, Coronavirus Respiratorio
canino, Cimurro CDV (quantitativo)
PH FK
SCID (immunodeficienza
Profilo
neurologico cane
combinata
grave)
[EB]
Listeria monocytogenes (DNA) [Va]
versamento
(già Haemobartonella felis)
varie
CHM
[EB, Ab]
Cardigan Welsh Corgi, Australian Shepherds, Border Collie, Chihuahua, Cocker Spaniel,
Dachshund, Catahoula Leopard Dog, Norwegian Hound, Pyrenean Shepherd, Pomeranian,
Fucosidosi – Springer Spaniel Inglese
Gangliosidosi GM1 – Husky, Cane da Acqua Portoghese
C USP
haemofelis (DNA)
midollo Mycoplasma
osseo
MYC
O FE
urine
[Va]
[EB]
10
0
feci
Colorazione del pelo merle – Shetland Sheepdogs, Collie, Great Danes,
FUC
GM1
Malattia da accumulo di rame – Bedlington Terrier
Paralisi ricorrente (HYPP)
334
Richiedo certificato (per
diGAgenetica
molecolare)
L2 H
da iperpotassiemia
[EB]analisi
L-2-HGA
(Aciduria L-2 idrossiglutarica) – Staffordshire Bull Terrier
B ARTAG
LCR
[Ab,[SwT]
K]
15
14
E. canis, E. ewingii, E. chaffeensis
- quantitativo
penna
[Sy]
Cryptococcus neoformans/
16
C. gattii (DNA)
[Li, Ab,[U]
K]
E H SP
ME RLE
Colorazione sauro
LI SP (1g)
pelo
[Pu]
C. psittaci, C. felis, C. abortus, C. caviae
18
[Sw]
E H RAG
PMH
- qualitativo [Ab, Pu, biopsia, U]
tampone
tracheale
LE I Q
LE PSP
[Ha]
[Va]
Chlamydia spp. (DNA)
spp. (DNA)
LE I Q
tampone
nasale
sangue con EDTA
23
21
Retriever, Pastore tedesco, German Shorthaired Pointer, German Wirehaired Pointer,
Setter Irlandese, Labrador Retriever
Deficienza di piruvatochinasi [EB]
339
n. registro genealogico:
Somalo (Ocicat), Abissino
Suino
26
20
Doberman Pinscher, Cocker Spaniel inglese, Springer Spaniel inglese, Flat-Coated
KAUGP
Hepatozoonfingerprinting“
canis(DNA) [EB, zecca]
ne genetica/DNA
Coronavirus felino FCoV/
22
FIPV, FECV (RNA)
[EB]
Border Collie, Beagle, Cardigan Welsh Corgi, Cocker Spaniel Americano, Dalmata,
CECoV, Parvovirus canino 2 CPV-2, Cimurro CDV
(qualitativo)
Kuvacs,
Lapponian Herder, Labrador Retriever, Barbone Nano e Toy, Nova Scotia Duck
Bovini Holstein-Frisian
Tolling Retriever, Cane da Acqua Portoghese, Pumi, Lapphund svedese e finlandese,
[K]
Helicobacter
[biopsia,SCK]RAP
„Test di
paternità“ espp.(DNA)
„Identificazio-
Coronavir. respiratorio can. (RNA)[Ab]
[EB]
C H LSP
[EB]
Encef. da puntura di zecca (RNA) [Va]
Giardia spp. (DNA)-PCR
utilizzare il modulo specifico
[As]
Influenza virale canina (RNA) [Ab]
Colorazione del pelo bruno – Australian Shepherd, Barbone, Bassotto,
Cryptococcus neoformans / C. gattii, Neospora spp., Toxoplasma gondii
Bassotto tedesco nano a pelo lungo e a pelo corto, Springer Spaniel inglese
[EB]
H E LI P
[ANa]
Parainfluenzavir. canino (RNA) [Ab]
C PFE
FE LLFB
British Shorthair, Exotic Shorthair,
Selkirk Rex e Scottish Fold
Identificazione del paziente
rdAc-PRA
[EB]
343
n. di tatuaggio:
Arabo
H E PC P
C RC VP
24
Terranova, Pointer, Cane da Acqua Portoghese, Scottish Terrier, Bracco di Weimar
Polycystic Kidney Disease (PKD) [EB]
P N EURO H
[EB]
B LAD
Per questi esami la preghiamo di
30
29
C PI V3 P
FC VP
Bouledogue Francese, Galgo Espanol, German Longhaired Pointer, German Shorthaired
Pointer, German Wirehaired Pointer, Labrador Retriever, Miniature Pinscher,
PO AH
[Va]
SC I D
FI LAP
Filaria spp. (DNA)
Test
di paternità
FI VD R
FIV (progenoma-DNA+vir.-RNA)
Identificazione genetica/
FE LVP
FeLV progenoma (DNA)
DNA fingerprinting
[Va]
32
EHV-4 (DNA)
In caso di più campioni, siete pre(DNA)
[Ab]
gati diEHV-5
utilizzare
il modulo specifico
di richiesta
la determiInfluenza
viraleperequina
(RNA) [Va]
nazione del sesso nei volatili”, che
FH V1
poteteHerpesvirus
richiedere aifelino
nostriFHV-1
uffici. (DNA) [Ab]
[Li]
34
Borrelia burgdorferi
sensu lato (DNA)
[EB]
Profili
PCRAppaloosa,
American
Paint Horse,
EHV-1 (DNA)
[Va]
Determinazione del sesso [EB, F,
E H V2
EHV-2 (DNA)
guscio/membrana
di uovo] [Ab]
Calicivirus felino FCV (RNA) [Ab]
05
04
36
35
Adenovirus canino tipo 2 (DNA) [Ab]
08
07
37
C C VP
11
10
Bornavirus (RNA)
38
C ALI P
14
13
Babesia spp. (DNA)
Bartonella spp. (DNA)
C AV2 P
20
19
[EB]
GE SB E
[EB]
A. phagocytophilum, A. platys
B AB SP
25
24
40
AN ASP
B ART SP
- Mutazione R820W
Possibile solo con modulo di richiesta
in tutte le sue parti!
MDcompilato
R1 A
American Quarterhorse ed incroci
MDR 1- disturbo (resistenza farmacologia multipla, ipersensibilità all’ivermectina)
O LWS
Ricerca di agenti patogeni tramite
PCR
determinazione del sesso
32
31
Cocker Spaniel inglese, Springer Spaniel inglese, Flat-Coated Retriever, Fox Terrier,
337
n. anello (volatili):
Cavallo
Profilo volatili II [F, EB + Ab, K]
Sesso
Profilo volatili I + Cp. psittaci
[EB]
Australian Shepherd, Barbone, Bassotto, Bedlington Terrier, Border Collie,
Cardigan Welsh Corgi, Cocker Spaniel Americano, Dalmata, Doberman Pinscher,
Somalo (Ocicat), Abissino, Siamese,
PYRD _ K
Profilo volatili I
238
Data di nascita:
PBFD, Polyomavirus
[EB]
[EB]
Colorazione del pelo biondo
[EB]
Bengala, Balinese, Javanese,
V
45
FE LLFG
[EB]
- Mutazione A74T*
n. di Oriental
microchip:
Tonchinese,
Shorthair
Z
Ab
PV-2
[EB]
Cistinuria (predisposizione genetica) – Terranova, Landseer
Nefropatia familiare (FN) – Cocker Spaniel inglese
HCM
- Mutazione A31P*
341
S
47
46
FN
Persiano, Himalaya, Siamese, Ragdoll,
PRA-K
240
Nome:
Volatili
R
PV-1
48
[EB]
Europeo, American Shorthair,
[K]
Razza/specie di volatile:
(compr. nome latino)
P
50
49
C YS_ N F
GSD4 Malattia da accumulato
Ragdoll ed incroci
Bioptat suino -Eierschale
Coronavirus
Gastroenterite
trasmissibile
(TGEV)Eimembran
(RNA)
[K]
U
[EB]
[EB]
IT
– Border Collie, Collie a pelo lungo e a pelo corto,
dell’ambulatorio
Pastore dello Shetland e Australian Shepherd, Silken Windhound
* Maine Coon ed incroci
KA
51
33
[Ab]
K
52
34
[Va]
Feder
(predisposizione genetica)
CLAD (Canine Leukocyte Adhesion Deficiency) – Setter Irlandese
Whippet a pelo lungo, Lancashire Heeler, Nova Scotia Duck Tolling Retrievers,
– Gatto Norvegese
HCM
Ha
244
H
53
142
GSD 4
ARhodococcus
cura del laboratorio
equi (DNA)
[Va]
-Abqualitativo
C LAD
CEY
Timbro
Siamese (GM1), Burmese (GM2)
[Va]
-Liquantitativo
[EB]
Gangliosidose GM1 + GM2 [EB]
Collie Eye Anomalie (CEA)
DIAGNOSTICA
MOLECOLARE
Gatto Korat (GM1 + GM2),
fattura al proprietario
Polyomavirus
(DNA)
[EB, F]
Circovirus suino 2 (DNA)
Dati del paziente
54
141
GAN G
[EB, F]
Sy
56
144
PBFD (DNA)
Cimurro
CDV (RNA)K
EB
STAP
55
40
Ill Convenienza economica
RH E P
STAPQ
Specie del paziente
43
42
Di regola, i risultati dei test sono disponibili entro
24 – 36 ore dal ricevimento del campione, salvo
casi particolari*.
Parvovirus felino FPV (DNA) [Ab, K]
PV
Chocolate/Cinnamon
[Li, K]
Parvovirus can. 2 CPV-2 (DNA) [Ab, F]
FPVP
PC V2
57
45
Neospora
numero
tel.spp. (DNA)
FC PVP
PB FD FE
66
53
41
II Risultati rapidi
N E O SP
69
Codice a barre
FE LLFC H
Prosegue dalla pagina precedente
70
firma del proprietario
44
* Con la sottocrizione del presente
modulo, il proprietario, come sopra
identificato accetta espressamente
di farsi carico personalmente dei costi
relativi agli esami clinici richiesti ed
eseguiti da IDEXX, la quale provvederà ad emettera relativa fattura a
lui intestata.
IDEXX Laboratories s.r.l.
** Dichiaro inoltre di avere preso
Via Guglielmo Silva, 36
visione e di aver sottoscritto l’Informativa privacy disponibile sul sito
IT - 20149 Milano
Internet www.idexx.it e, a tale riNumero
verde 800 917 940 opz. 1
guardo,
ai sensimalattie
dell’
Testacconsento
genetici:
genetiche
Articolo 23 del D. Lgs. n. 196/2003
Numero verde fax 800 906 945
all’elaborazione,
archiviazione e
Gatto
Cane · www.idexx.it
[email protected]
trattamento dei miei dati personali
C MH
da
parte di IDEXX Laboratories
Italia S.r.l.
Ipertermia canina maligna
Colorazione
del mantello
I157 – Stampa del 03-2013
I
4
8
01
(
· Avete domande su IDEXX RealPCR™?
· Siete interessati a profili non ancora indicati?
· Saremo lieti di ricevere i vostri suggerimenti.
Il nostro servizio di consulenza specialistica è a
vostra completa disposizione per rispondere a
tutte le domande sulla diagnosi e l’interpretazione
dei risultati.
IDEXX Vet·Med·Lab
di IDEXX Laboratories Italia S.r.l.
20149 Milano
www.idexx.it
Laboratorio di riferimento Assistenza clienti:
lunedì – venerdì 8.30 –18.30
sabato 10.00 –14.00
Numero Verde 800 917 940 opz 1
Fax Verde 800 906 945
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© 2013 IDEXX Laboratories, Inc. Tutti i diritti riservati • IT227-0114
Veloce. Accurata. Specifica.
IDEXX RealPCR™
Diagnostica all'avanguardia con la PCR quantitativa
Che cos’è la PCR?
Associare metodi diversi per
aumentare l’affidabilità.
possibilità di amplificare un segmento specifico tra i numerosi
acidi nucleici (DNA o RNA) contenuti in un campione fino a
renderne possibile l’identificazione, oppure sequenziare tale
DNA per l’ulteriore identificazione/caratterizzazione. La porzione di acido nucleico che viene amplificata per il rilevamento
dei patogeni infettivi contiene sequenze di DNA o di RNA che
sono specifiche per tale patogeno, mentre nel caso della determinazione delle malattie ereditarie, sono sequenze geniche
contenenti la mutazione corrispondente.
PCR
Reazione a catena della polimerasi
1
Cane A: infezione recente. Cane eventualmente sintomatico.
Antigene presente nel sangue e rilevabile con la PCR. Reazione immunitaria non ancora avvenuta, quindi esami sierologici
negativi.
Campione
PCR su
sangue
Sierologia
Ad IDEXX Vet·Med·Lab sottoponiamo a rigorosi controlli
di processo sia il sistema di PCR quantitativa chiuso, sia il
sistema PCR convenzionale assicurando una costante
gestione della qualità.
Limite di
rilevabilità
Cane B: sintomatico. Risultato della PCR positivo, anche se
la quantità di antigene nel sangue sta già calando. Anche gli
esami sierologici sono positivi, dato che la risposta immunitaria
è già stata messa in atto.
Cane C: malattia cronica. Settimane o anni dopo l’infezione.
Cane eventualmente asintomatico. Gli esami sierologici sono
positivi, ma il risultato della PCR è negativo poiché nel sangue
non circolano più antigeni liberi.
Cellula
Estrazione
L’esordio dei sintomi dopo un’infezione varia a seconda
del soggetto e del patogeno in causa. La soluzione ottimale è quindi una combinazione di PCR e sierologia
Risultato positivo
La PCR (Polymerase Chain Reaction – reazione a catena
della polimerasi) rappresenta il metodo di base per le
indagini diagnostiche basate sulle tecniche di genetica
molecolare, tra cui la rilevazione dei patogeni infettivi e l’analisi genetica delle mutazioni. La PCR consente di rilevare con
elevata sensibilità concentrazioni anche minime di antigeni
presenti nel materiale prelevato al paziente, attraverso l’amplificazione in vitro di specifiche sequenze geniche di DNA o
RNA. Il vantaggio diagnostico della PCR è rappresentato dalla
Qualità senza confronti
Cane A
Cane B
Cane C
Tempo dall’infezione
I 6 controlli di qualità riportati di seguito ci consentono di
valutare in modo affidabile i risultati della PCR, siano essi
negativi o positivi.
In quale stadio dell’infezione si trova il paziente?
DNA

Amplificazione esponenziale
attraverso cicli ripetuti
Controlli di qualità per IDEXX RealPCR™
[

Sequenza bersaglio
3
A B C
Amplificazione
Separazione
della doppia elica
del DNA in due
filamenti singoli
complementari
(denaturazione)
Legame del
primer sulla sequenza bersaglio
(ibridazione)
ed estensione
del primer
Replica/
raddoppio
della sequenza
bersaglio
Rilevazione
La sonda di DNA specifica identifica
la sequenza bersaglio amplificata
Confronto tra PCR e sierologia: indicazioni sull'uso appropriato di questi ausili diagnostici
La PCR è lo strumento diagnostico ideale per confermare o escludere la presenza di un agente infettivo negli
animali.
La formazione degli anticorpi, la cui rilevazione in circolo
tramite test sierologici può servire a confermare un'eventuale
presenza di agenti infettivi, richiede generalmente da 2 a 3
settimane circa, ma per alcune infezioni (ad esempio anaplasmosi o babesiosi) può essere fondamentale l'identificazione
rapida dell'agente patogeno.
La PCR ha quindi il grande vantaggio, rispetto ai test sierologici, di permettere molto spesso il rilevamento dei patogeni
ben prima che si abbia la sieroconversione, ovvero entro i
primi 10 –14 giorni dall’infezione, aumentando così di molto la
finestra diagnostica.
L’associazione di PCR e sierologia può essere, inoltre, utile
qualora sia sconosciuto il momento esatto in cui è avvenuta
l’infezione.
Un ulteriore vantaggio della diagnostica molecolare è rappresentato dalla maggiore sensibilità e specificità del metodo
che aumenta l’affidabilità dei risultati del test. Come nel caso
di altri metodi diagnostici si sconsiglia l’uso della sola PCR.
Tutte le diagnosi devono sempre tenere in considerazione i
sintomi clinici e i risultati degli altri esami complementari.
La PCR quantitativa è più affidabile, più veloce ed
è il metodo più stabile.
In un test di PCR quantitativa, l’amplificazione e la rilevazione avvengono all’interno dello stesso recipiente di reazione,
mentre nel metodo standard, o convenzionale, il DNA amplificato richiede un’ulteriore elaborazione mediante elettroforesi
su gel per poter rendere visibili le sezioni di DNA. Il sistema
chiuso riduce quindi al minimo le contaminazioni. Inoltre, un
vantaggio importante della PCR quantitativa rispetto alla PCR
convenzionale è la possibilità di effettuare l’analisi quantitativa
dei dati. Grazie ai marcatori fluorescenti utilizzati nella PCR
quantitativa, è possibile stabilire una relazione lineare con la
quantità di DNA in un range fino a 10 livelli logaritmici.
Per esempio, disponendo dei dati scientifici appropriati, la
quantificazione del livello di acido nucleico del patogeno,
in combinazione con i dati sierologici, consente di stabilire
l’esatto stato d’infezione di un animale (ad es. leishmaniosi),
oppure valutare il fattore che contribuisce alla malattia (ad es.
i geni della tossina di Clostridium perfringens).
L’informazione quantitativa sul livello di acido nucleico del patogeno consente, inoltre, di distinguere l’interferenza vaccinale
Controllo
funzionale
Curve di amplificazione
Controllo
preanalitico
2. Controllo positivo PCR
•
•
3. Controllo di estrazione
negativo
•
4. Controllo di qualità dei
campioni
5. Controllo positivo interno
Cicli
Misurazioni della fluorescenza per realizzare una curva standard
per la quantificazione del DNA di Leishmania.
dall’infezione causata da un ceppo di campo del patogeno in
quanto i livelli del patogeno sono quasi sempre esponenzialmente maggiori durante l’infezione rispetto a quelli che seguono una vaccinazione recente (ad es. cimurro).
Un altro uso importante della PCR quantitativa è il monitoraggio della terapia.
6. Monitoraggio ambientale
Controllo della
contaminazione
•
1. Controllo negativo PCR
Fluorescenza (481-533)
2
Vantaggi della PCR quantitativa rispetto
alla PCR convenzionale
•
•
Garantiamo risultati affidabili conformemente ai nostri standard di accreditamento
(DIN ISO 17025, DIN 58967-60 e MIQ, gli standard di qualità nella diagnostica microbiologica
delle malattie infettive).
PCR
1
negativi.
Campione
PCR su
sangue
Sierologia
Limite di
rilevabilità
Cellula
Estrazione
Risultato positivo
Cane A
Cane B
Cane C
DNA

[

Sequenza bersaglio
3
A B C
Amplificazione
Separazione
della doppia elica
del DNA in due
filamenti singoli
complementari
(denaturazione)
Legame del
(ibridazione)
ed estensione
del primer
Replica/
raddoppio
della sequenza
bersaglio
Rilevazione
animali.
l’infezione.
Controllo
funzionale
Controllo
preanalitico
•
•
negativo
•
campioni
Cicli
Controllo della
contaminazione
•
2
•
•
PCR
1
negativi.
Campione
PCR su
sangue
Sierologia
Limite di
rilevabilità
Cellula
Estrazione
Risultato positivo
Cane A
Cane B
Cane C
DNA

[

Sequenza bersaglio
3
A B C
Amplificazione
Separazione
della doppia elica
del DNA in due
filamenti singoli
complementari
(denaturazione)
Legame del
(ibridazione)
ed estensione
del primer
Replica/
raddoppio
della sequenza
bersaglio
Rilevazione
animali.
l’infezione.
Controllo
funzionale
Controllo
preanalitico
•
•
negativo
•
campioni
Cicli
Controllo della
contaminazione
•
2
•
•
Informazione
Via
IDEXX Vet·Med·Lab
Ricerca di agenti
Codice fiscale
71
68
67
54
65
64
52
63
51
62
50
61
49
60
48
59
47
58
46
T OXP
39
38
37
36
35
Cane
143
Gatto
T GE VP
T T FP
Coniglio
Cavallo
140
Bovino
139
Pecora
138
Capra
137
Suino
136
Volatile
135
altro:
H C M2
H C MR
Toxoplasma
gondii (DNA)
Pu
Zecke
[Va, non feci]
FD
PK D
PV-3
44
43
PV-4
42
[F, EB]
FUC H S
235
maschio
[F, EB]
234
femmina
H YPP
233
castrato
41
30
29
28
27
26
B AB FP
Babesia felis (DNA)
39
23
22
21
B O RN AG
B O RRG
B RUC SP
18
17
16
15
12
09
06
03
02
01
E H V1 4
E H V1 4
[EB]
E H V5
[EB]
E“modulo
I VP
Brucella spp. (DNA)
33
[Va]
31
FSME P
GI ARSP
28
CECoV (RNA)
[K, Ab]
C H V1
C I VP
27
LAWI P
Abbreviazioni:
aspiraatLeishmania
25
C H LVP
C RYPN P
[ATr]
[Ab]
[KM]
[F]
19
C. psitacci (DNA)
17
[K]
[Ab,[Li]
K]
13
E ADV1
E AVP
12
11
1
2
4
8
[EB]
GLO B Z
MUH 7
Profilo occhi gatto
Pecora
8
2
[EB]
PYRD _ B
[EB]
[EB]
[EB]
[EB]
[EB]
[EB]
[zecca]
VWFGE N 3 2 (cane)
PO AP
XSC I D
[ANa]
PO AF
[ANa + ATr]
Timbro
4
[EB]
[EB]
Blue Terrier
spp.,
VWFGE
PZ
[Ab]
1
[K]
[EB]
PRA-I
PFH M
Profilo
micoplasmi
PRA-R
Ipertermia
maligna
suina emotrofi
[EB] gatto
rcd2-PRA – Collie
[EB]
0
[EB]
[Ab]
PZB
[EB]
[EB]
[EB]
8
09
08
07
06
05
04
03
02
0
1
2
4
8
0
1
2
4
8
0
1
2
[EB]
Scrapie
PO AK
respiratorie
(predisposizione
[EB]
[Va]
4
[Li]
2
[EB]
[EB]
MYT UP
1
[EB]
cord1-PRA
[EB]
[EB]
C D PP
PRA-P
prcd-PRA
Bovino
FD PP
turicensis (DNA)
liquido sinoviale
[EB]
[EB]
alpha
Toxin-gene
(quantitativo),
Austr.
Cattle
Dog, American
BLAD (Bovine
Leukocyte
Coronavirus
enterico
canino
Chinese Crested,
Cocker
Spaniel
AdhesionClostridium
Deficiency)
[EB]
[Va]
Mycoplasma
tamponeCand.
con terreno
di trasporto
MYO LR
[EB, KM]
[EB]
canis) [EB]
ghiamo di firmare
[Va]
0
[EB]
Pinto, Quarter
ProfiloHorse,
vie respiratorie
cane
[Ab]
MYO C
BB
Cecità
Arabo ed incroci
PH FK
Profilo
neurologico cane
combinata
grave)
[EB]
versamento
varie
CHM
[EB, Ab]
C USP
haemofelis (DNA)
midollo Mycoplasma
osseo
MYC
O FE
urine
[Va]
[EB]
10
0
feci
FUC
GM1
334
diGAgenetica
molecolare)
L2 H
da iperpotassiemia
[EB]analisi
L-2-HGA
B ARTAG
LCR
[Ab,[SwT]
K]
15
14
- quantitativo
penna
[Sy]
16
C. gattii (DNA)
[Li, Ab,[U]
K]
E H SP
ME RLE
Colorazione sauro
LI SP (1g)
pelo
[Pu]
18
[Sw]
E H RAG
PMH
tampone
tracheale
LE I Q
LE PSP
[Ha]
[Va]
spp. (DNA)
LE I Q
tampone
nasale
sangue con EDTA
23
21
339
Suino
26
20
KAUGP
ne genetica/DNA
22
FIPV, FECV (RNA)
[EB]
(qualitativo)
Kuvacs,
[K]
Helicobacter
[biopsia,SCK]RAP
„Test di
„Identificazio-
[EB]
C H LSP
[EB]
[As]
[EB]
H E LI P
[ANa]
C PFE
FE LLFB
rdAc-PRA
[EB]
343
n. di tatuaggio:
Arabo
H E PC P
C RC VP
24
P N EURO H
[EB]
B LAD
30
29
C PI V3 P
FC VP
PO AH
[Va]
SC I D
FI LAP
Filaria spp. (DNA)
Test
di paternità
FI VD R
FE LVP
DNA fingerprinting
[Va]
32
EHV-4 (DNA)
[Ab]
gati diEHV-5
utilizzare
il modulo specifico
di richiesta
la determiInfluenza
viraleperequina
(RNA) [Va]
FH V1
poteteHerpesvirus
richiedere aifelino
nostriFHV-1
uffici. (DNA) [Ab]
[Li]
34
sensu lato (DNA)
[EB]
Profili
PCRAppaloosa,
American
Paint Horse,
EHV-1 (DNA)
[Va]
E H V2
EHV-2 (DNA)
guscio/membrana
di uovo] [Ab]
05
04
36
35
08
07
37
C C VP
11
10
Bornavirus (RNA)
38
C ALI P
14
13
Babesia spp. (DNA)
C AV2 P
20
19
[EB]
GE SB E
[EB]
B AB SP
25
24
40
AN ASP
B ART SP
- Mutazione R820W
MDcompilato
R1 A
O LWS
PCR
32
31
337
Cavallo
Sesso
[EB]
PYRD _ K
Profilo volatili I
238
Data di nascita:
PBFD, Polyomavirus
[EB]
[EB]
[EB]
V
45
FE LLFG
[EB]
- Mutazione A74T*
n. di Oriental
microchip:
Tonchinese,
Shorthair
Z
Ab
PV-2
[EB]
HCM
- Mutazione A31P*
341
S
47
46
FN
PRA-K
240
Nome:
Volatili
R
PV-1
48
[EB]
[K]
P
50
49
C YS_ N F
Ragdoll ed incroci
Coronavirus
Gastroenterite
trasmissibile
(TGEV)Eimembran
(RNA)
[K]
U
[EB]
[EB]
IT
dell’ambulatorio
KA
51
33
[Ab]
K
52
34
[Va]
Feder
– Gatto Norvegese
HCM
Ha
244
H
53
142
GSD 4
ARhodococcus
equi (DNA)
[Va]
-Abqualitativo
C LAD
CEY
Timbro
[Va]
-Liquantitativo
[EB]
DIAGNOSTICA
MOLECOLARE
Polyomavirus
(DNA)
[EB, F]
Dati del paziente
54
141
GAN G
[EB, F]
Sy
56
144
PBFD (DNA)
Cimurro
CDV (RNA)K
EB
STAP
55
40
RH E P
STAPQ
Specie del paziente
43
42
casi particolari*.
PV
Chocolate/Cinnamon
[Li, K]
FPVP
PC V2
57
45
Neospora
numero
tel.spp. (DNA)
FC PVP
PB FD FE
66
53
41
II Risultati rapidi
N E O SP
69
Codice a barre
FE LLFC H
70
44
lui intestata.
IT - 20149 Milano
verde 800 917 940 opz. 1
guardo,
ai sensimalattie
dell’
Testacconsento
genetici:
genetiche
all’elaborazione,
archiviazione e
Gatto
[email protected]
C MH
da
Italia S.r.l.
Colorazione
del mantello
I
4
8
01
(
dei risultati.
IDEXX Vet·Med·Lab
20149 Milano
www.idexx.it
sabato 10.00 –14.00
Fax Verde 800 906 945
IDEXX RealPCR™
Informazione
Via
IDEXX Vet·Med·Lab
Ricerca di agenti
Codice fiscale
71
68
67
54
65
64
52
63
51
62
50
61
49
60
48
59
47
58
46
T OXP
39
38
37
36
35
Cane
143
Gatto
T GE VP
T T FP
Coniglio
Cavallo
140
Bovino
139
Pecora
138
Capra
137
Suino
136
Volatile
135
altro:
H C M2
H C MR
Toxoplasma
gondii (DNA)
Pu
Zecke
[Va, non feci]
FD
PK D
PV-3
44
43
PV-4
42
[F, EB]
FUC H S
235
maschio
[F, EB]
234
femmina
H YPP
233
castrato
41
30
29
28
27
26
B AB FP
Babesia felis (DNA)
39
23
22
21
B O RN AG
B O RRG
B RUC SP
18
17
16
15
12
09
06
03
02
01
E H V1 4
E H V1 4
[EB]
E H V5
[EB]
E“modulo
I VP
Brucella spp. (DNA)
33
[Va]
31
FSME P
GI ARSP
28
CECoV (RNA)
[K, Ab]
C H V1
C I VP
27
LAWI P
Abbreviazioni:
aspiraatLeishmania
25
C H LVP
C RYPN P
[ATr]
[Ab]
[KM]
[F]
19
C. psitacci (DNA)
17
[K]
[Ab,[Li]
K]
13
E ADV1
E AVP
12
11
1
2
4
8
[EB]
GLO B Z
MUH 7
Profilo occhi gatto
Pecora
8
2
[EB]
PYRD _ B
[EB]
[EB]
[EB]
[EB]
[EB]
[EB]
[zecca]
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PO AP
XSC I D
[ANa]
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[ANa + ATr]
Timbro
4
[EB]
[EB]
Blue Terrier
spp.,
VWFGE
PZ
[Ab]
1
[K]
[EB]
PRA-I
PFH M
Profilo
micoplasmi
PRA-R
Ipertermia
maligna
suina emotrofi
[EB] gatto
rcd2-PRA – Collie
[EB]
0
[EB]
[Ab]
PZB
[EB]
[EB]
[EB]
8
09
08
07
06
05
04
03
02
0
1
2
4
8
0
1
2
4
8
0
1
2
[EB]
Scrapie
PO AK
respiratorie
(predisposizione
[EB]
[Va]
4
[Li]
2
[EB]
[EB]
MYT UP
1
[EB]
cord1-PRA
[EB]
[EB]
C D PP
PRA-P
prcd-PRA
Bovino
FD PP
turicensis (DNA)
liquido sinoviale
[EB]
[EB]
alpha
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(quantitativo),
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Cattle
Dog, American
BLAD (Bovine
Leukocyte
Coronavirus
enterico
canino
Chinese Crested,
Cocker
Spaniel
AdhesionClostridium
Deficiency)
[EB]
[Va]
Mycoplasma
tamponeCand.
con terreno
di trasporto
MYO LR
[EB, KM]
[EB]
canis) [EB]
ghiamo di firmare
[Va]
0
[EB]
Pinto, Quarter
ProfiloHorse,
vie respiratorie
cane
[Ab]
MYO C
BB
Cecità
Arabo ed incroci
PH FK
Profilo
neurologico cane
combinata
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[EB]
versamento
varie
CHM
[EB, Ab]
C USP
haemofelis (DNA)
midollo Mycoplasma
osseo
MYC
O FE
urine
[Va]
[EB]
10
0
feci
FUC
GM1
334
diGAgenetica
molecolare)
L2 H
da iperpotassiemia
[EB]analisi
L-2-HGA
B ARTAG
LCR
[Ab,[SwT]
K]
15
14
- quantitativo
penna
[Sy]
16
C. gattii (DNA)
[Li, Ab,[U]
K]
E H SP
ME RLE
Colorazione sauro
LI SP (1g)
pelo
[Pu]
18
[Sw]
E H RAG
PMH
tampone
tracheale
LE I Q
LE PSP
[Ha]
[Va]
spp. (DNA)
LE I Q
tampone
nasale
sangue con EDTA
23
21
339
Suino
26
20
KAUGP
ne genetica/DNA
22
FIPV, FECV (RNA)
[EB]
(qualitativo)
Kuvacs,
[K]
Helicobacter
[biopsia,SCK]RAP
„Test di
„Identificazio-
[EB]
C H LSP
[EB]
[As]
[EB]
H E LI P
[ANa]
C PFE
FE LLFB
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[EB]
343
n. di tatuaggio:
Arabo
H E PC P
C RC VP
24
P N EURO H
[EB]
B LAD
30
29
C PI V3 P
FC VP
PO AH
[Va]
SC I D
FI LAP
Filaria spp. (DNA)
Test
di paternità
FI VD R
FE LVP
DNA fingerprinting
[Va]
32
EHV-4 (DNA)
[Ab]
gati diEHV-5
utilizzare
il modulo specifico
di richiesta
la determiInfluenza
viraleperequina
(RNA) [Va]
FH V1
poteteHerpesvirus
richiedere aifelino
nostriFHV-1
uffici. (DNA) [Ab]
[Li]
34
sensu lato (DNA)
[EB]
Profili
PCRAppaloosa,
American
Paint Horse,
EHV-1 (DNA)
[Va]
E H V2
EHV-2 (DNA)
guscio/membrana
di uovo] [Ab]
05
04
36
35
08
07
37
C C VP
11
10
Bornavirus (RNA)
38
C ALI P
14
13
Babesia spp. (DNA)
C AV2 P
20
19
[EB]
GE SB E
[EB]
B AB SP
25
24
40
AN ASP
B ART SP
- Mutazione R820W
MDcompilato
R1 A
O LWS
PCR
32
31
337
Cavallo
Sesso
[EB]
PYRD _ K
Profilo volatili I
238
Data di nascita:
PBFD, Polyomavirus
[EB]
[EB]
[EB]
V
45
FE LLFG
[EB]
- Mutazione A74T*
n. di Oriental
microchip:
Tonchinese,
Shorthair
Z
Ab
PV-2
[EB]
HCM
- Mutazione A31P*
341
S
47
46
FN
PRA-K
240
Nome:
Volatili
R
PV-1
48
[EB]
[K]
P
50
49
C YS_ N F
Ragdoll ed incroci
Coronavirus
Gastroenterite
trasmissibile
(TGEV)Eimembran
(RNA)
[K]
U
[EB]
[EB]
IT
dell’ambulatorio
KA
51
33
[Ab]
K
52
34
[Va]
Feder
– Gatto Norvegese
HCM
Ha
244
H
53
142
GSD 4
ARhodococcus
equi (DNA)
[Va]
-Abqualitativo
C LAD
CEY
Timbro
[Va]
-Liquantitativo
[EB]
DIAGNOSTICA
MOLECOLARE
Polyomavirus
(DNA)
[EB, F]
Dati del paziente
54
141
GAN G
[EB, F]
Sy
56
144
PBFD (DNA)
Cimurro
CDV (RNA)K
EB
STAP
55
40
RH E P
STAPQ
Specie del paziente
43
42
casi particolari*.
PV
Chocolate/Cinnamon
[Li, K]
FPVP
PC V2
57
45
Neospora
numero
tel.spp. (DNA)
FC PVP
PB FD FE
66
53
41
II Risultati rapidi
N E O SP
69
Codice a barre
FE LLFC H
70
44
lui intestata.
IT - 20149 Milano
verde 800 917 940 opz. 1
guardo,
ai sensimalattie
dell’
Testacconsento
genetici:
genetiche
all’elaborazione,
archiviazione e
Gatto
[email protected]
C MH
da
Italia S.r.l.
Colorazione
del mantello
I
4
8
01
(
dei risultati.
IDEXX Vet·Med·Lab
20149 Milano
www.idexx.it
sabato 10.00 –14.00
Fax Verde 800 906 945
IDEXX RealPCR™